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ASMC小鼠气道平滑肌细胞细胞购买zlzt生物

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所在地区:湖北 时间:2023-12-06【加入收藏夹】【关闭

货源介绍

  智立中特(武汉)生物科技有限公司主要致力于质粒微生物资源的保护、共享和持续利用,围绕我国生命科学研究、生物技术创新和产业发展等重大需求,探索、发现、收集国内外的微生物资源,妥善长期保存管理;在保证生物安全和保护知识产权的前提下,为工农业生产、卫生健康、环境保护、科研教育提供质粒载体物物种资源、基因资源、信息资源和专业技术服务。旗下质粒载体网是一款提供质粒载体展示及定制的专业型网站,由智立中特(武汉)生物科技有限公司联合多家企业公司科研院校共同打造!主要展示了各种基因类型下的质粒载体!

  我们的工作主要包括:广泛分离、收集、保藏、交换和供应各类微生物质粒菌种;保存用于专利程序的各种可培养生物材料;质粒载体类保藏技术研究;微生物分离、培养技术研究;微生物鉴定和复核技术研究;保藏菌种的资料情报收集和提供及编辑微生物菌种目录。

  目前保存各类载体资源超过20000余种 ,质粒微生物约5000株,另外我们还代理国外微生物菌种资源,如addgene,安捷伦,thermo,atcc等。

  ASMC小鼠气道平滑肌细胞细胞购买zlzt生物

  细胞特性

  1) 来源:小鼠,气道

  2) 形态:成纤维样,贴壁生长

  3) 含量:>1x106  细胞数

  4) 规格:T25瓶或者1mL冻存管包装

  5)用途:仅供科研使用。

  运输和保存

  干冰运输及复苏好存活细胞

  (1)1mL冻存管包装干冰运输,收到后-80度冰箱保存过夜后转入液氮或直接复苏,若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染,请立即与我们联系。

  (2)T25瓶复苏的存活细胞常温发货,收到后按照细胞接收后的处理方法操作。

  细胞接收后的处理

  1)收到细胞后,75%酒精消毒瓶壁将T25瓶置于37℃培养箱放置约2-3h,若发现培养瓶破损、有液溢出及细胞有污染,请拍照后及时联系我们。

  2)请在4或5X显微镜下确认细胞状态,同时给刚收到的细胞拍照(10×,20×)各2-3张以及培养瓶外观照片一张留存,作为售后时收到时细胞状态的依据。

  3)贴壁细胞:细胞在37℃培养箱中放置2-3h,显微镜下观察细胞的生长和贴壁情况,有些贴壁细胞在快递运送过程中会因振动脱落和脱落后成团的情况。若镜下观察细胞的生长密度若在60%以下,可去除培养瓶中灌液培养基(若有未贴壁的细胞需要离心回收,重悬打入到原培养瓶中),加入新配制的完全培养基6-8mL,放到细胞培养箱中继续培养。若细胞生长密度达70%-80%以上,可以对细胞进行传代处理。传代过程中,若因运输振动脱落的细胞需要离心回收。

  4)备注:运输用的培养基(灌液培养基)不能再用来培养细胞,请换用按照说明书细胞培养条件新配制的完全培养基来培养细胞。  收到细胞后第一次传代建议T25培养瓶1:2传代 。

  细胞培养步骤

  一.培养基及培养冻存条件准备

  1) 准备1640)培养基;优质胎牛血清,10%;双抗,1%。

  2) 培养条件: 气相:空气,95%;二氧化碳,5%。 温度:37摄氏度,培养箱湿度为70%-80%。

  3) 冻存液:90%血清,10%DMSO,现用现配。

  二、细胞处理:

  1) 冻存细胞的复苏:

  将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶(或皿)中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

  2) 细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。

  对于贴壁细胞传代可以参考以下方法:

  1. 弃去培养上清,用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

  2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中(T25瓶1-2mL,T75瓶2-3mL),置于37℃培养箱中消化1-2分钟(难消化的细胞可以适当延长消化时间),然后在显微镜下观察细胞消化情况,若细胞大部分变圆并脱落,迅速拿回操作台,轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

  3.轻轻打匀后吸出,在1000RPM条件下离心3-5min,弃去上清液,补加1-2mL培养液后吹匀。将细胞悬液按1:2的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力,后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

  3)细胞冻存: 收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

  下面T25瓶为例;

  1. 细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中,可使用血球计数板计数,来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

  2. 1000rpm离心3-5min,去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞 ,按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中,标注好名称、代数、日期等信息。

  3. 将要冻存的细胞置于程序降温盒中,-80度冰箱中过夜,之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。

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