货源介绍

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　　名称E.G7-OVA(小鼠T淋巴瘤细胞)

　　别称E.G7-Ova

　　种属小鼠

　　组织来源T淋巴细胞

　　生长特性悬浮细胞

　　细胞形态淋巴母细胞样

　　背景描述E.G7-OVA细胞是于1988年建系，源自C57BL/6(H-2b)小鼠的经电转质粒pAc-neo-OVA(鸡OVA基因)的淋巴细胞系EL4。

　　生物安全等级1

　　生长培养基RPMI-1640＋0.05mMβ-mercaptoethanol＋0.4mg/ml G418＋10%FBS＋1%P/S

　　推荐传代比例1×10^5-1×10^6个/ml

　　推荐换液频率2~3次/周

　　冻存条件

　　冻存液：55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO

　　温度：液氮

　　培养条件

　　气相：空气，95%；CO2，5%

　　温度：37℃

　　抗原表达情况H-2 b

　　基因表达情况chicken ovalbumin

　　保藏机构ATCC;CRL-2113

　　细胞处理：

　　1）冻存细胞的复苏：

　　将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入到含4-6mL完全培养基的离心管中混合均匀。在1000RPM条件下离心3-5min，弃去上清液，完全培养基重悬细胞。然后将细胞悬液加入含6-8ml完全培养基的培养瓶（或皿）中37℃培养过夜。第二天显微镜下观察细胞生长情况和细胞密度。

　　2）细胞传代：如果细胞密度达70%-90%，即可进行传代培养。

　　该细胞为悬浮和轻微的贴壁细胞，传代可以参考以下方法：

　　1.收集：将培养瓶中的悬浮的细胞收集到离心管中。用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。由于细胞贴壁不牢PBS润洗后细胞会脱落所以PBS也要回收到离心管中。

　　2.加入0.25％（w/v）胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培养瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培养箱中消化1-2分钟（难消化的细胞可以适当延长消化时间），然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加入3-4ml含10%FBS的培养基来终止消化。

　　3.将收集到的悬浮细胞、pbs清洗液中的细胞和消化下来的贴壁细胞以1000rpml离心5min，弃去上清，补加1-2mL培养液后重悬混匀后将细胞悬液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照说明书要求配置的新的完全培养基以保持细胞的生长活力，后续传代根据实际情况按1:2~1:5的比例进行。

　　3）细胞冻存:收到细胞后建议在培养前3代时冻存一批细胞种子以备后续实验使用。

　　下面T25瓶为例；

　　1.细胞冻存时按照细胞传代的过程收集消化好的细胞到离心管中，可使用血球计数板计数，来决定细胞的冻存密度。一般细胞的推荐冻存密度为1×106~1×107个活细胞/ml.

　　2.1000rpm离心3-5min，去掉上清。用配制好的细胞冻存液重悬细胞，按每1ml冻存液含1×106~1×107个活细胞/ml分配到一个冻存管中将细胞分配到冻存管中，标注好名称、代数、日期等信息。

　　3.将要冻存的细胞置于程序降温盒中，-80度冰箱中过夜，之后转入液氮容器中储存。同时记录好冻存管在液氮容器中的位置以便后续查阅和使用。