货源介绍

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　　细胞名称：人嗜酸性粒细胞HESP

　　产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

　　细胞数量：1x10^6；1x10^6

　　保存温度：37℃；-198℃

　　运输方式：常温保温运输；干冰运输

　　安全等级：1

　　用途限制：仅供科研3类

　　培养体系：DMEM(HYCLONE SH30022.01)+10%FBS+1%三抗

　　培养温度：37℃

　　二氧化碳浓度：5%

　　简介：人嗜酸性粒细胞HESP取自女性外周血，悬浮培养。

　　注释：倍增时间35h

　　复苏细胞收货注意事项：

　　收到细胞后，静置3小时，然后当天更换新鲜培养基！！！原瓶培养基不能继续使

　　用！！！该细胞订单用户订购前，需核实确认。

　　培养基货号DMEM(HYCLONE SH30022.01或GIBCO C11965500BT）

　　胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常pH值为7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。

　　冻存细胞收货注意事项：

　　收到细胞后，当天存入-80℃冰箱或者-196℃的液氮罐中保存！！！该细胞订单用户订购前，需核实确认（冻存细胞以收到细胞后起14天之内为售后保障期，不是保存多日开始复苏后的14天之内）培养基货号DMEM(HYCLONE SH30022.01或GIBCO C11965500BT）

　　胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常pH值为7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。

　　常见问题：

　　1.运输途中，细胞会因为晃动造成细胞脱落，此现象为正常现象，观察后，静置3小时。2.传代后细胞漂浮原因：传代前密度过大导致细胞挤出凋亡；消化过度；移液枪吹打力道过大。3.细胞复苏后贴壁性不好，尝试换液并血清提至15%，待观察，若效果还不佳，需要联系销售及技术老师。4.本产品有添加支原体抗污染剂及三抗（青霉素，链霉素，两性霉素B），若收到细胞后2天内，发现细胞污染，请立即联系对应销售进行补发；3-14天之内的污染，需要联系对应销售沟通并且核实详情后，进行下一步售后处理。细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，水浴锅，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，三抗

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需复苏的细胞，移液枪，枪头，离心管

　　实验步骤：

　　1.从液氮罐中取出冻存管，直接浸入37℃温水中，并不时摇动令其尽快融化。

　　2.从37℃水浴中取出冻存管，打开盖子，移液枪吸出细胞悬液，加到离心管并滴加5倍以上完全培养基并混匀。

　　3.操作离心，调至1000转/分，时长10分钟

　　4.弃去上清液，重悬离心管底部细胞沉淀，在T25培养瓶中加入5-6ml完全培养基，计数，调整细胞密度，接种培养瓶，37℃培养箱静置培养。

　　5.次日更换一次培养液，继续培养。

　　6.注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个T25培养瓶中

　　细胞传代操作说明（贴壁细胞）实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管

　　实验步骤：

　　1.细胞于培养箱中，愈合度达到80%，可进行传代。

　　2.按T25培养瓶计，吸出完全培养基，并PBS缓冲液轻冲3遍，添加0.25%含EDTA胰酶2ml，消化2min（具体时间视细胞而定），后用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min离心10 min，弃上清收集细胞，铺至2个T25培养瓶中培养，各添加7ml完全培养基。

　　3.注意：消化时间不易过长，消化前血清成分务必去除干净，终止消化请用新鲜完全培养基，原瓶培养基不可继续使用（终止消化或传代）。细胞传代操作说明（悬浮细胞）实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，三抗

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需传代的细胞，移液枪，枪头，离心管

　　实验步骤：

　　1.细胞于培养箱中，密度达到悬浮细胞传代标准（沉降后可铺满底面），可进行传代。2.按T25培养瓶计，吹打均匀，吸出完全培养基，1000r/min离心10 min，弃上清收集细胞，铺至2个T25培养瓶中培养，各添加7ml完全培养基。

　　3.注意：原瓶培养基不可继续使用（传代）。

　　细胞冻存操作说明

　　实验仪器：超净工作台，CO2培养箱，倒置显微镜，离心机

　　实验试剂：DMEM培养基，胎牛血清，0.25%胰酶，三抗，DMSO

　　实验材料：T25细胞培养瓶，需冻存的细胞，移液枪，枪头，离心管，冻存管，记号笔实验步骤：

　　1.取待冻存的细胞（按T25计）用0.25EDTA胰酶2ml消化2min，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min离心10min，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞，则可直接离心收集细胞。2.加入1ml冻存液(90%FBS+10%DMSO)制成细胞悬液。

　　3.细胞悬液装入3支冻存管中。

　　4.冻存管在4℃下存放30 min，转放-20℃1.5～2 h，再转人-70℃4-12 h后即可转移到液氮内(-196℃)，并登记。