货源介绍

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　　质粒载体网是质粒构建及应用研究的专业平台,提供质粒构建和应用技术的最新进展和实用方法,为科研人员提供质粒相关研究的最新动态和资源支持。

　　一、CA46细胞源于Burkitt's淋巴瘤病人的腹水液，是Magrath建立的系列淋巴瘤细胞系之一。CA46细胞EBV核抗原(EBNA)阴性，表达表面IgM和分泌不能与A蛋白结合的IgM，12％的群体细胞表达补体受体，但不表达Fc受体。CA46细胞生长的群体倍增时间是16小时，具较快的生长速度。

　　种属:人

　　组织来源:腹水液

　　生长特性:悬浮

　　细胞形态:淋巴母细胞样

　　生长培养基:RPMI-1640＋20%FBS＋1%P/S

　　培养条件气相：空气，95%；CO2，5%温度：37℃

　　二、Raji(人Burkitt's淋巴瘤细胞)的功能

　　（1）血管平滑肌细胞的再生能力是原发血管病变的重要因素。

　　（2）表达钙通道及ICAM-1和VCAM-1，参与血管壁的炎症反应。

　　（3）与血管疾病的进展和稳定有关。

　　生理变化：

　　（1）主动脉硬化。

　　（2）主动脉瘤

　　（3）主动脉钙化。

　　基本特性：

　　（1）组织来源于正常大鼠大动脉组织。

　　（2）鉴定：肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色。

　　（3）原代细胞培养末期液氮冻存。

　　（4）每冻存管细胞数：>5×105 cells/1ml。

　　（5）肌动蛋白，alpha-SMA和Desmin免疫荧光染色验证。

　　（6）不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌。

　　三、Raji(人Burkitt's淋巴瘤细胞)的运输和保存

　　视天气状况和运输距离远近，公司与客户协商后选择下述方式中的一种进行。

　　1)1mL冻存细胞悬液装于1.8ml的冻存管中，置于装满干冰的泡沫保温盒中进行运输；收到细胞后请尽快解冻复苏细胞进行培养，如无法立刻进行复苏操作，冻存细胞可在-80℃的条件下保存1个月。

　　2)T-25培养瓶充满完全培养基后进行常温运输；收到细胞后请镜下观察细胞生长状态，如铺瓶率超过85%请立即进行传代操作，如悬浮的细胞较多，请将培养瓶至于培养箱中静置过夜以帮助未死亡的悬浮细胞能够再次贴壁。

　　操作流程：

　　1.1主要试剂与仪器：倒置相差显微镜（日本olympus imt-413），co2孵箱（日本yamato it-61）。

　　1.2 hek-293细胞的复苏培养传代及冻存：

　　1.2.1细胞的复苏培养从液氮罐中取出冻存管,立即投入37℃水浴,并不断的摇动,使之迅速融化。将溶解的细胞冻存管取出,用酒精消毒后打开,吸出溶有细胞的冻存液,加入事先装好培养液（37℃预热，8～10倍体积）离心管内,稍微吹打混匀,然后1000rpm 5min,去除上清,加入适量培养液,吹打成细胞悬液,以1×105/ml密度接种于25cm2培养瓶内，在37℃、5％co2及饱和湿度下培养。

　　1.2.2细胞传代原代培养的hek－293细胞48h换液1次，细胞长至60%～70%融合时，用0.25%胰酶消化1～2min，将培养瓶再用手掌轻轻敲打使细胞脱壁、悬浮、分散，为使细胞进一步分散可用吹打管轻轻吹打几次，获得细胞悬液，然后加入倍量的培养基，温和混匀，吸管分装混合液，传代扩增细胞。

　　1.3细胞形态的观察在倒置显微镜下观察并记录细胞的生长情况及形态特征。

　　1.4细胞的计数常规消化细胞，待细胞变圆、脱壁并浮起，加入少量培养基离心，再用pbs重悬并吹打制成细胞悬液。在细胞计数板盖玻片的一侧加微量细胞悬液，用10×物镜观察计数板四角大方格细胞数，按公式计算出细胞数。细胞数/ml原液＝(四方格细胞数之和/4)×104。

　　1.5细胞的贴壁率指数生长期的细胞，以0.25％胰酶消化成单细胞悬液，计数后分别接种于12个25cm2培养瓶中，每两小时随机取出3瓶细胞，吸除培养基及未贴壁细胞，加入胰消化酶消化、计数已贴壁细胞，取其平均值，按照公式：贴壁率(%)=(已贴壁细胞数/接种细胞数)×100％，计算贴壁率。

　　1.6生长曲线取指数生长期的细胞用胰酶消化制成单细胞悬液，以1×104/孔接种于24孔板，每孔加入1ml培养基。每天随机取3孔，计数每孔细胞的数目并计算平均值。连续计数10d，绘制细胞生长曲线。

　　四、注意事项

　　(1)严格无菌操作；

　　(2)本产品只供科研使用，不可应用于临床。